答案：
D
【解析】
动物细胞培养的条件:
(1)无菌、无毒的环境:(1)消毒、灭菌；(2)添加一定量的抗生素；(3)定期更换培养液,以清除代谢废物。
(2)营养物质:糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等，还需加入血清、血浆等天然物质。
（3）温度和pH：36.5℃±0.5℃；适宜的pH：7.2~7.4。
（4）气体环境：95%空气（细胞代谢必需的）和5%的CO2（维持培养液的pH）。
A、用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理以获得单细胞悬液，A错误；
B、充入5%CO2是维持培养液的pH，B错误；
C、加入血清为动物细胞提供营养，高压蒸汽灭菌会破坏血清中的活性成分，C错误；
D、定期更换培养液以清除代谢产物，D正确。
故选D。