Question

某实验小组为了探究土壤中的微生物对尿素是否有分解作用，设计了相关实验，并成功筛选到能高效降解尿素的细菌。培养基成分如下表所示。请分析并回答下列问题：

KH2PO4	Na2HPO4	MgSO4·7H2O	葡萄糖	尿素	琼脂
1.4g	2.1g	0.2g	lg	10g	15g
将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL

（1）上述培养基从物理状态看属于___________培养基。培养基中加入了尿素，在用途上又属于___________培养基。

（2）鉴定土壤中可分解尿素的细菌的方法是在以尿素为唯一氮源的培养基中加入_____________________。

（3）转入固体培养基时，常采用稀释涂布平板法进行接种，获得单菌落后继续筛选，可以依据菌落的___________、隆起程度、颜色等筛选出符合要求的菌种。若通过培养统计到5个相同培养皿中各自菌落数分别为20、28、45、33、54，则平均菌落数是___________。

（4）假设采用平板划线法接种，培养结束后，发现培养基上菌落连成一片，可能的原因是____________________________________。

Answer

固体 选择 酚红指示剂 形状、大小 44 稀释倍数不够，菌液的浓度太高；划线时，划完第一次没有灭菌即接着划第二次；培养过程中灭菌不严格，受到了其他微生物的污染（任答一个即可）

【解析】

培养基的类型

（1）按物理性质分：

名称

特征

功能

固体培养基

外观显固体状态的培养基

主要用于微生物的分离、鉴定

液体培养基

呈液体状态的培养基

主要用于工业生产

（2）按化学性质分：

名称

特征

功能

天然培养基

用于化学成分不明确的天然物质配成

主要用于工业生产

合成培养基

用化学成分已知的化学物质配成

主要用于微生物的分类、鉴定

（3）按功能分：

种类

制备方法

特征

用途

选择培养基

培养基中加入某种化学成分

根据某种微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基使混合菌样中的劣势菌变成优势菌，从而提高该菌的筛选率

加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌

鉴别培养基

加入某种试剂或化学药品

依据微生物产生的某种代谢产物与培养基中特定试剂或化学药品反应，产生明显的特征变化而设计

鉴别和区分菌落相似的微生物伊红和美蓝培养基可以鉴别大肠杆菌

（1）从培养基配方表添加组分可知，添加有琼脂，故上述培养基从物理状态看属于固体培养基。培养基中加入了尿素，是为了筛选到能高效降解尿素的细菌，故在用途上又属于选择培养基。

（2）在细菌分解尿素的化学反应中，细菌结合的脲酶将尿素分解成了氨。氨会使培养基的碱性增加，使pH升高，在培养基中加入酚红指示剂，由于pH的升高，指示剂会变红，故鉴定土壤中可分解尿素的细菌的方法是在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。

（3）转入固体培养基时，常采用稀释涂布平板法进行接种，获得单菌落后继续筛选，可以依据菌落的形状、大小、隆起程度、颜色等筛选出符合要求的菌种。在菌落计数时，一般选择菌落数在30﹣300的平板进行计数，故用于计数的平板有3个，菌落数分别为45、33、54，故平均菌落数是（45+33+54）÷3＝44。

（4）假设采用平板划线法接种，培养结束后，发现培养基上菌落连成一片，可能的原因是稀释倍数不够，菌液的浓度太高；划线时，划完第一次没有灭菌即接着划第二次；培养过程中灭菌不严格，受到了其他微生物的污染。