Question

腺病毒为双链DNA病毒，具有很高的致病性，我国科学家研发的腺病毒载体重组新冠病毒疫苗进展顺利，该疫苗以改造过的复制缺陷型腺病毒为载体，搭载上新冠病毒的S基因，进入受试者体内，使人体产生对S蛋白的免疫记忆。回答下列问题：

(1)新冠病毒为RNA病毒，简述获得新冠病毒的S基因的过程：________________。

(2)构建重组DNA分子时需要用到限制酶，限制酶的作用是_____________；若选用两种限制酶对新冠病毒的S基因进行切割，目的是______（答出两点即可）；基因工程中常用的DNA连接酶有两种，分别是______和_______，后者既能连接平末端又能连接黏性末端。

(3)疫苗制备中选取复制缺陷型腺病毒作为载体可以防止_______，进而提高疫苗的安全性。

(4)疫苗注射入人体后，S蛋白作为______可引起人体产生特异性免疫反应。

Answer

提取病毒的RNA，通过逆转录获得其对应的DNA，PCR技术扩增得到S基因（或对病毒s基因进行测序，然后人工合成S基因） 识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列并且断开特定部位的磷酸二酯键 防止S基因自身环化、防止S基因与运载体反向连接 E.coliDNA连接酶 T4-DNA连接酶 病毒在人体内进行增殖 抗原

【解析】

基因工程技术的基本步骤：

（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。

（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。

（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。

（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因-DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA-分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质-抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

（1）新冠病毒为RNA病毒，可提取该病毒的RNA，通过逆转录获得其对应的DNA，再通过PCR技术扩增得到该病毒的S基因（或对病毒S基因进行测序，然后人工合成S基因）。

（2）基因工程中限制酶的作用是识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列并且断开特定部位的磷酸二酯键；

由于同种限制酶切割得到的两端黏性末端相同，用DNA连接酶连接时可出现S基因自身环化以及S基因与运载体反向连接的现象，所以常选用两种限制酶对新冠病毒的S基因进行切割，目的是防止S基因自身环化、防止S基因与运载体反向连接；

基因工程中常用的DNA连接酶有两种，分别是E•coliDNA连接酶和T4-DNA连接酶。

（3）复制缺陷型腺病毒不能增殖，在疫苗制备中选取复制缺陷型腺病毒作为载体可以防止病毒在人体内进行增殖，进而提高疫苗的安全性。

（4）疫苗注射入人体后，S蛋白合成的场所是人体细胞内的核糖体，S蛋白作为抗原可引起人体产生特异性免疫反应。