Question

请回答下列内容：

（1）氨基酸序列分析技术和DNA序列分析的方法，为基因序列图的绘制提供了可能。DNA合成仪的问世为___________、探针、小分子量DNA基因的获得提供了方便。

（2）研究人员用大肠杆菌作生产菌，利用基因工程技术分别生产胰岛素两条链。由A、B两条肽链可推导出A、B基因的碱基序列，依据是______________________。因为A、B基因中的脱氧核苷酸数量较少，常用___________方法获取目的基因。

（3）目的基因扩增通常采用PCR技术，一个DNA在第三次扩增需引物对数为___________。

（4）检测A、B基因是否导入受体细胞时，常用___________作探针。检测胰岛素基因是否表达常用___________杂交方法。

（5）引导肽是由引导肽基因控制合成的一段多肽序列，若在胰岛素的A、B肽链的前端加上引导肽序列后，可将A、B肽链引导到大肠杆菌的细胞膜外，便于A、B肽链提取。为实现上述目的，操作是______________________。在以后的体外加工过程中，需要用___________切除引导肽。

Answer

引物 氨基酸和密码子的对应关系和碱基互补配对原则 人工合成 4 放射性标记的A、B基因的一条单链 抗原—抗体 将A、B基因连接在引导肽基因后 肽酶

【解析】

基因工程技术的基本步骤：

（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。

（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。

（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。

（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

（1）DNA合成仪可以用于体外DNA分子小的片段的合成，因此为小分子量的DNA的合成、PCR扩增中引物的合成以及基因工程中基因探针的制作提供了方便。

（2）根据胰岛素两条链上的氨基酸序列，利用氨基酸与密码子的对应关系可以推导出mRNA上的核苷酸序列，进而根据碱基互补配对的关系推导出合成胰岛素A、B两条肽链的A、B基因的碱基序列。因为A、B基因中的脱氧核苷酸数量较少，常用人工合成法合成目的基因。

（3）一个DNA复制两次得到4个DNA分子，在第三次扩增时需引物对数为4对。

（4）检测A、B基因是否导入受体细胞时，常用同位素标记的目的基因的单链作为探针（放射性标记的A、B基因的一条单链），与从受体细胞内取出的核DNA分子的单链进行杂交，观察有无杂交带的出现。检测胰岛素基因是否表达出胰岛素时，常用抗原-抗体杂交法判断。

（5）根据题意，在胰岛素的A、B肽链的前端加上引导肽序列后，可将A、B肽链引导到大肠杆菌的细胞膜外，便于A、B肽链提取，为了达到这一目的可以将将A、B基因连接在引导肽基因后构建成基因表达载体，导入大肠杆菌细胞内。该胰岛素分泌后还需要切除引导肽序列，因此根据酶的专一性，需要用肽酶切除引导肽。